Pesquisadores do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo (ICB-USP) atestaram a eficácia de três novos testes sorológicos para Covid-19. Desenvolvidos no próprio ICB, os testes usam o método ELISA (ensaio de imunoabsorção enzimática) para a detecção dos anticorpos contra o vírus SARS-CoV-2, e tiveram sua eficácia comparada com outro teste já em uso no mercado, o Elecsys, da farmacêutica Roche.
Publicado na revista Frontiers in Cellular and Infection Microbiology em junho deste ano, o trabalho foi feito com base em 1.119 amostras do sangue de pessoas que tiveram ou não tiveram contato com a doença. Os testes foram conduzidos no Hospital Universitário da USP ao longo do ano de 2020, portanto mostram um cenário ainda sem vacinas.
Na avaliação, o teste Elecsys, comercializado pela farmacêutica Roche, garantiu 96,92% de sensibilidade (capacidade de detectar casos positivos) e 98,78% de especificidade (capacidade de identificar casos negativos). O desempenho dos demais testes, do ICB, não ficaram aquém. O teste N-ELISA, que avalia uma proteína N completa do Coronavírus, registrou 93,94% de sensibilidade e 94,40% de especificidade. Já o teste RBD-ELISA, que utiliza um fragmento da proteína Spike do Coronavírus, obteve 90,91% e 88,80% de eficácia nesses dois critérios, respectivamente, enquanto o Delta-S1-ELISA, que utiliza um outro fragmento da Spike, apontou uma sensibilidade de 77,27% e uma especificidade de 76%.
“Mostramos que os testes são eficazes em uma época em que não havia vacinas. Logo, os pacientes não tinham como produzir anticorpos a não ser pela infecção. Isso dá mais assertividade aos resultados. E obtivemos resultados tão bons com o teste N-ELISA que conseguimos imaginá-lo sendo utilizado comercialmente no futuro. Por adotar uma proteína que é utilizada comercialmente, diferente dos nossos outros dois testes, o caminho é potencialmente menos longo”, destaca Robert Andreata-Santos, doutor em microbiologia pelo ICB e primeiro autor do estudo.
Além disso, os testes RBD-ELISA e N-ELISA talvez possam, no futuro, ser usados para diferenciar se o anticorpo foi criado pela vacinação ou pela infecção. “Ser eficaz na detecção de anticorpos contra a proteína RBD, que está presente em todas as formulações vacinais atuais, como também contra a proteína N, relacionada com casos de exposição ao Coronavírus, indica que em estudos futuros haverá a possibilidade de diferenciar anticorpos produzidos contra a vacina ou contra a infecção quando utilizados ambos os testes”, afirma Robert Andreata-Santos.
Padrão ouro de análise – Todos os exames foram validados contra o próprio Coronavírus por meio do teste de neutralização, considerado o padrão ouro para esse tipo de análise. O soro sanguíneo foi aplicado no teste para distinguir quais amostras neutralizavam e quais amostras não neutralizavam o SARS-CoV-2, sendo que as amostras neutralizadas eram consideradas positivas para Covid-19. Em seguida, esses resultados foram comparados com os resultados dos testes ELISA.
“Utilizamos o padrão ouro porque ele consegue ter sensibilidades e especificidades elevadas já que é capaz de calcular a carga de anticorpos neutralizantes do paciente”, afirma Machado. “Além disso, como o SARS-CoV-2 foi neutralizado, a possibilidade de os anticorpos criados em virtude da infecção pelo Coronavírus ou por outro patógeno apresentarem reação cruzada é extremamente reduzida”, complementa Andreata-Santos.
O método também é capaz de identificar se um anticorpo é neutralizante (pode impedir novas infecções), ou se é um anticorpo apenas de ligação (só reconhece uma região do vírus). Desta forma, a metodologia elimina quase todas as dúvidas que podem surgir a respeito dos dados de eficácia dos testes ELISA.
Colaboração extensa – Para realizar todo esse trabalho, foi necessária uma colaboração extensa de profissionais da Universidade. Os docentes Paulo Margarido, Ricardo Fock e Juliana Bannwart, do Hospital Universitário, foram responsáveis pela coleta do soro e avaliação das amostras por Elecsys. Na execução, no processamento e na análise dos testes de neutralização houve a colaboração de diversos laboratórios do ICB. Em suas respectivas competências, contribuíram os grupos de trabalho coordenados pelos docentes Luís Carlos de Souza Ferreira, Edison Luiz Durigon, Silvia Beatriz Boscardin e Cristiane Rodrigues Guzzo.
Com isso, a pesquisa contou com o financiamento de diversas agências de fomento, de forma direta (disponibilizando verba específica para a execução do projeto) ou indireta (dispensando bolsas para bancar a permanência dos pesquisadores nos laboratórios, independente do projeto). Contribuíram com o trabalho a Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (Fapesp), a Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e o Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).
